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       紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當(dāng)光穿過被測物質(zhì)溶液時，物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質(zhì)在不同波長處的吸光度，并繪制其吸光度與波長的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長λmax和最小吸收波長λmin。物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。因此，可以通過特定波長范圍內(nèi)樣品的光譜與對照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較，或通過確定最大吸收波長，或通過測量兩個特定波長處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時，在最大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。

應(yīng)用

1.檢定物質(zhì)

根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長λ max和摩爾吸收系數(shù)ε，是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。

2.與標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照

將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測定條件要相同。

3.比較最大吸收波長吸收系數(shù)的一致性

由于紫外吸收光譜只含有2～3個較寬的吸收帶，而紫外光譜主要是分子內(nèi)的發(fā)色團在紫外區(qū)產(chǎn)生的吸收，與分子和其它部分關(guān)系不大。具有相同發(fā)色團的不同分子結(jié)構(gòu)，在較大分子中不影響發(fā)色團的紫外吸收光譜，不同的分子結(jié)構(gòu)有可能有相同的紫外吸收光譜，但它們的吸收系數(shù)是有差別的。如果分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收波長相同，吸收系數(shù)也相同，則可認(rèn)為分析樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一物質(zhì)。

4.反應(yīng)動力學(xué)研究

借助于分光光度法可以得出一些化學(xué)反應(yīng)速度常數(shù)，并從兩個或兩個以上溫度條件下得到的速度數(shù)據(jù)，得出反應(yīng)活化能。

5.純度檢驗

紫外吸收光譜能測定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質(zhì)。如果化合物的紫外可見光區(qū)沒有明顯的吸收峰，而它的雜質(zhì)在紫外區(qū)內(nèi)有較強的吸收峰，就可以檢測出化合物中的雜質(zhì)。

6.氫鍵強度的測定

不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。

7.絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定[1]

影響

折疊溶液濃度的影響

當(dāng)溶液濃度較大時，吸光質(zhì)點間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了它對光的吸收。因此，朗伯-比耳定律只適用于稀溶液3.

折疊化學(xué)反應(yīng)的影響

溶液中存在著解離、締合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡，化學(xué)平衡與濃度、pH等其他條件密切相關(guān)。不同條件可導(dǎo)致吸光質(zhì)點濃度變化,吸光性質(zhì)發(fā)生變化而偏離朗伯-比耳定律

消除方法為控制反應(yīng)條件。例如，在鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡:2Cr02+2H+ Cr02+ HO。Cr02、Cr02的顏色不同，吸光性質(zhì)也不同。用光度法測定CrO.2或Cr,0-2含量時，溶液濃度及酸度的改變都會導(dǎo)致平衡移動而發(fā)生對朗伯-比耳定律的偏離，為此應(yīng)加入強堿或強酸作緩沖溶液以控制酸度。

折疊非平行光和光散射的影響

當(dāng)入射光是非平行光時，所有光通過介質(zhì)的光的光程不同，引起小的偏離。另外，當(dāng)溶液中含有懸浮物或膠粒等散射質(zhì)點時，入射光通過溶液時就會有一部分光因散射而損失掉，使透過光強度減小，測得的吸光度增大，從而引起偏離吸收定律