天津農(nóng)殘級(jí)二氯甲烷彪仕奇教您如何讓快速過柱子。干法快速過柱技術(shù)結(jié)合了色譜法的速度和分離，使用更便宜的TLC級(jí)二氧化硅，操作簡(jiǎn)單，沒有特殊的設(shè)備要求。干法快速柱色譜通過底部抽真空而不是頂部加壓來加速洗脫速度，從而避免了玻璃柱爆炸的風(fēng)險(xiǎn)。另外，柱子中的洗脫劑可以流干再加洗脫劑。這些特征使得該方法特別適用于梯度洗脫，實(shí)際上，這也是是開發(fā)此類層析柱的首選方式。梯度洗脫使用極性逐漸增加的洗脫劑梯度洗脫，開始時(shí)用小極性洗脫體系洗去弱極性成份，然后增大極性洗脫大極性化合物，這既可以節(jié)省大量時(shí)間，又不失好的分離效果。
干法快速過柱是柱色譜中唯一允許空氣進(jìn)入色譜柱的分離方法。實(shí)際上，整個(gè)過程都適用經(jīng)典色譜的所有原理，但是它能夠以更低的成本給出至少與標(biāo)準(zhǔn)柱層析技術(shù)一樣好的結(jié)果，而且特別適用于分離高達(dá)50克的樣品，因此該方法長期以來在各種實(shí)驗(yàn)室中已被廣泛使用。
選擇溶劑系統(tǒng)
所用的洗脫溶劑系統(tǒng)應(yīng)該是通過TLC分析所需組分的Rf值為0.5的溶劑系統(tǒng)。雖然沒有特別不適合該技術(shù)的溶劑，但是己烷，乙醚，乙酸乙酯和甲醇的各種組合對(duì)于大多數(shù)分離應(yīng)該是足夠的。當(dāng)系統(tǒng)處于減壓下時(shí)，收集的一些溶劑將蒸發(fā)并可使接收容器溫度降低，以至于大氣中的水份會(huì)在裝置上凝結(jié)，這不會(huì)影響分離的效率。但是，如果過柱子時(shí)間過長，一些水可能會(huì)進(jìn)入收集的餾分中。在這方面，使用揮發(fā)性較低的庚烷代替石油醚有一定幫助。
裝柱子
用于這種色譜的硅膠是沒有添加石膏粘合劑的TLC級(jí)二氧化硅。這比快速柱層析所用的硅膠要便宜，而且對(duì)各種干法柱來說，活性已足夠。對(duì)于每種尺寸的漏斗，應(yīng)在推薦的硅膠重量填充柱并抽吸壓實(shí)后，提供足夠的頂部空間來容納洗脫劑。負(fù)壓可以使二氧化硅變得緊湊，但壓實(shí)過程中因?yàn)楣枘z從漏斗的側(cè)面收縮可能會(huì)在內(nèi)部形成看不到的裂縫，特別是對(duì)于較大尺寸的柱。這時(shí)可以使用玻璃塞在邊緣處用力向下按壓表面。不用擔(dān)心硅膠表面的狀態(tài)，因?yàn)楫?dāng)用刮刀在漏斗的側(cè)面周圍反復(fù)輕輕敲擊后可以讓表明變平。
裝好柱子就可以用洗脫系統(tǒng)中極性最小的組分預(yù)洗脫色譜柱。在預(yù)洗脫期間保持硅膠表面覆蓋有溶劑，直到溶劑進(jìn)入接收瓶，然后使硅膠被吸干。如果溶劑前沿不平，只需將色譜柱吸干，重新壓縮，然后重復(fù)預(yù)洗脫程序。
注意：壓實(shí)后的硅膠表面在添加溶劑時(shí)相對(duì)穩(wěn)定，不需要任何沙子保護(hù)層。
上樣和洗脫色譜柱
將樣品溶解在盡可能少的預(yù)洗脫溶劑中，在柱底抽吸的情況下，均勻地將其加到硅膠表面。沖洗樣品容器并將洗滌液添加到色譜柱中，直到所有樣品都已轉(zhuǎn)移。如果樣品在預(yù)洗脫溶劑中溶解不好，可以將其溶解在易溶的最小極性組合的洗脫溶劑中。
使用上樣的溶劑組合開始梯度洗脫，遵循表中級(jí)分大小的指導(dǎo)原則。允許讓柱子抽干，將第一部分接液轉(zhuǎn)移到試管或其它方便的容器中，清洗燒瓶和漏斗柄。當(dāng)柱子抽干時(shí)，準(zhǔn)備下一份洗脫液，遞加5%的極性。重復(fù)這樣的洗脫程序。直到僅用純的，更大極性的組分洗脫。
分離過程應(yīng)進(jìn)行餾分的TLC監(jiān)測(cè)。當(dāng)純化大于約100mg的樣品時(shí)。通常通過漏斗下側(cè)的起泡來指示產(chǎn)物從柱中的洗脫。如果產(chǎn)品是固體。它可能在漏斗或接收瓶的莖中結(jié)晶出來，特別是在分離較大量的物質(zhì)時(shí)，務(wù)必在兩份收液之間，徹底清洗接受瓶和漏斗柄，并檢查確保固體不會(huì)阻塞洗脫。典型的低程度的產(chǎn)物橫向擴(kuò)散帶，常常意味著純化合物的洗脫組分相對(duì)較少，減少了交叉污染的份數(shù)。如果粗樣中不含聚合物，樣品會(huì)很好回收。
處理硅膠
洗脫完成后，將硅膠吸干，然后將其轉(zhuǎn)移到特定收集箱中。通常將柱子倒置并敲打或用洗耳球加壓可以容易的將所以硅膠倒。一如既往，應(yīng)注意不要在把大量的硅膠粉塵弄到實(shí)驗(yàn)室空氣中。
天津農(nóng)殘級(jí)二氯甲烷彪仕奇提醒您，熟能生巧，這種方法用的多了自然而然就會(huì)輕車熟路，效果甚至比自動(dòng)過柱機(jī)都快，當(dāng)然前提你要對(duì)自己的樣品的極性非常熟悉，對(duì)溶劑的洗脫效果也要非常熟悉，才能很好地使用此法。
